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原位雜交-植物組織原位雜交-武漢貝科新肽公司(多圖)

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同一樣本可以多次做原位雜交實驗嗎?

一般情況下，如果操作沒有得到理想的結(jié)果，是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標型探針，還可以使用不同探針對同一樣本進行反復雜交。針對不同的樣本，處理方法略有不同。

原位雜交實操中哪些因素比較重要?

重要的因素：溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率；光照影響著熒光染料的強度，所以探針要避光保存，其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存；各種試劑pH也要達到要求，這也直接關系到原位雜交的穩(wěn)定性。

植物組織原位雜交的步驟包括以下幾個方面：

1. 制備組織樣品：從植物中取出需要研究的組織樣品，如根、莖、葉等。

2. 固定組織樣品：將組織樣品固定在載玻片上，通常使用或乙醇等化學物質(zhì)進行固定。

3. 處理組織樣品：對固定的組織樣品進行脫水、透明化、脫脂等處理，以便于DNA探針的穿透和結(jié)合。

4. 制備DNA探針：根據(jù)需要研究的基因序列，設計并合成DNA探針。DNA探針可以標記熒光染料或性同位素，以便于檢測。

5. 雜交DNA探針：將DNA探針與組織樣品進行雜交，通常需要在高溫下進行，以便于DNA探針與RNA或DNA結(jié)合。

6. 檢測雜交信號：通過熒光顯微鏡或計數(shù)器等設備，檢測DNA探針與RNA或DNA的結(jié)合情況，確定目標基因的表達模式和位置。

原位雜交技術可以應用于以下場景：

組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位。例如，可以用于檢測EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA等。

癌基因、抑癌基因及其他各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測。

檢測染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。

在植物基因組研究中的應用。例如，通過與特定基因序列的探針進行雜交，可以在植物染色體上定位到目標基因的位置，進而構建遺傳圖譜，為植物育種和基因組研究提供基礎數(shù)據(jù)。

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